بررسی میزان شیوع کریپتوسپوریدیوم انسانی در شهر ارومیه و تعیین گونه های انگل با استفاده از آنالیز PCR

کریپتوسپوریدیوم یک پروتوزوئر زئونوز است که به عنوان عامل مهم اسهال آندمیک و اپیدمیک شناخته شده که اغلب
کودکان و بیماران دچار نقص سیستم ایمنی بویژه مصرف کننده داروهای سرکوبگر ایمنی سلولار و هومورال را تهدید
میکند. مطالعه حاضر با هدف بررسی میزان شیوع کریپتوسپوریدیوم و ارتباط آن با برخی از متغیرها و تمایز ایزوله
های انسانی بر مبنای قطعه 597bp ژن 85s rRNA ، جهت تعیین گونه های شایع این انگل در ارومیه طراحی و اجرا شد. در
8011 نمونه مدفوع از آزمایشگاههای ارومیه مورد بررسی قرار گرفت. پس - - ، این مطالعه توصیفی مقطعی، طی تیر 49 خرداد 49
ازتغلیظ با روش فرمالین اتیل استات، در ادامه گسترشهای تهیه شده بروش کاینیون اسید فاست رنگ آمیزی شد، جهت -
بررسی مولکولی نمونه های مثبت بروشهای گرادیانت منقطع ساکارز و گرادیانت پرکول مورد تخلیص و جداسازی قرار گرفتند
در مرحله بعد DNA ژنومی استخراج و قطعه ژن 85s rRNA جدایه ها با روش Nested-PCR تکثیر گردید، سپس
محصول PCR با آنزیم محدود کننده Vsp8 برش داده و تعیین ترداف شد. پردازش اطلاعات با بهره گیری از نرم
افزار Excell,v.0189 و v., 84 SPSS انجام پذیرفت. برای تعیین ارتباط بین متغیرها از آزمون )کای اسکوئر χ0 ( با
1٪( مثبت / اطمینان 47 ٪ استفاده شد.از نمونه های رنگ آمیزی شده بروش کاینیون اسید فاست 88 نمونه ) 40
تشخیص داده شد، آنالیز داده ها نشان داد که اختلاف معنی داری مابین میزان شیوع انگل در گروههای سنی مختلف، محل
سکونت، فصل/ماه ابتلا و ابتلا به نقص سیستم ایمنی با افراد عادی وجود داشت) P<1,18 ( ولی در مورد گروههای جنسی
تفاوت معنی داری در میزان شیوع وجود نداشت ) P>1,18 (. همه نمونه های مثبت با روش Nested-PCR تأیید شد. نتایج
PCR-RFLP روی ژن 85s rRNA نشان داد که از میان 88 ایزوله مثبت انسانی ، 4 ایزوله دارای ژنوتایپ
کریپتوسپوریدیوم پاروم و 0 ایزوله دیگر ژنوتایپ هومنیس بود که بیانگر غالبیت مطلق کریپتوسپوریدیوم پاروم حیوانی در
آلودگیهای انسانی بود.

شناسایی جنسیت جنین انسان از طریق پلاسمای مادر باردار

عنوان مقاله: شناسایی جنسیت جنین انسان از طریق پلاسمای مادر باردار 

قالب بندی: word

شرح مختصر:

تشخیص پیش از تولد(Prenatal Diagnosis) جنسیت جنین، نیازمند روش­های تهاجمی نظیر نمونه‌گیری از طریق آمنیوسنتز و نمونه‌گیری از پرزهای کوریونی(CVS) می‌باشد. در سال­های اخیر، یکی از روشهای غیر تهاجمی بررسی حضور DNA سلولهای هسته‌دار جنینی در پلاسمای خون مادر است که در این تحقیق مورد بررسی قرار گرفت.

روش بررسی: در این مطالعه تجربی، سیستمNested-PCR برای تشخیص ژن SRY جنینی با بکارگیری DNA جنینی از پلاسمای خون مادر باردار طراحی و بهینه­سازی گردید. نمونه­های خونی 32 زن باردار در هفته­های 13-8 آبستنی جمع­آوری و سپس DNA سلولها به روش فنل/کلرفرم استخراج گردید. در سیستم Nested-PCR، ژن SRY با دو جفت پرایمر طراحی شده تکثیر شد. حضور توالی­های کروموزوم Y در پلاسمای خون مادر نشان­دهنده جنسیت پسر جنین و در صورت فقدان آن نشان­دهنده جنسیت دختر بود.

یافته­ها: از 32 زن باردار، پس از تکثیر ژن SRY به روش Nested-PCR، در 14مورد نتیجه مثبت بود، بطوری­که در 18زن دارای جنین دختر نتایج مثبت دیده نشد و نتایج به­دست آمده حساسیت 5/87 درصد را نشان داد.

نتیجه­گیری: روشاستخراجفنل/کلرفرم یک روش ساده و موثر برای جدا سازی DNA جنین از پلاسمای خون مادر می­باشد و روش Nested-PCR روشی غیر تهاجمی ارزان و دردسترس برای برای تشخیص پیش از تولد می­باشد